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解决蛋白质不溶解这一细菌基因表达中的障碍

ArcticExpress (D3)  感受态细胞可用于解决蛋白质不溶解这一细菌基因表达中的常见障碍。这些细胞来源于高性能  Agilent BL21-Gold  感受态细胞，可实现异源蛋白质在大肠杆菌中的高效高水平表达。

在大肠杆菌中强制性高水平表达异源蛋白质会导致产生大量错误折叠的蛋白质，产生无活性蛋白聚集体，称为包涵体。虽然聚集的蛋白质易于纯化，但是从包涵体获得活性蛋白质通常需要蛋白质特异性和费时费力的体外再折叠步骤，且不能保证获得生物学活性产物。ArcticExpress (D3)  感受态细胞是一种增加大肠杆菌中可溶性蛋白质产量的体内方法。

仅限研究使用。不可用于诊断目的。

1、低生长温度（或冷适应技术）可增加蛋白质折叠和溶解度。

2、细胞来源于高性能  Agilent BL21-Gold  感受态细胞。

3、具有伴侣蛋白  Cpn60  和  Cpn10，以促进正确折叠。

4、伴侣蛋白在较低温度下改善蛋白质处理过程，增加活性可溶性重组蛋白质的产量。

性能指标

工作原理

蛋白质表达系统和诱导方法

ArcticExpress  菌株表达重组蛋白质。由  T7  启动子驱动的载体表达的重组蛋白质使用  DE3  溶菌原  ArcticExpress (DE3)  宿主菌株，该菌株包含一个染色体集成盒，其中由  lacUV5  启动子表达  T7 RNA  聚合酶。采用  IPTG  诱导  T7 RNA  聚合酶表达导致  T7  启动子驱动的重组蛋白表达。由  IPTG  诱导型启动子（非  T7  启动子）表达的重组蛋白质使用非  DE3  溶菌原  ArcticExpress  宿主菌株。

克服密码子偏好性

RIL  和  RP  菌株中的限制性  tRNA  能够让  BL21  中难以表达的许多异源重组基因得到高水平表达。

RIL  和  (DE3)RIL  细胞含有编码  tRNA  的基因，能够识别精氨酸密码子  AGA  和  AGG、异亮氨酸密码子  AUA  和亮氨酸密码子  CUA。RIL  菌株含有  tRNA，限制了富含  AT  的基因组生物体的异源蛋白质翻译。

RP  和  (DE3)RP  细胞编码  tRNA  识别精氨酸密码子  AGA  和  AGG  以及脯氨酸密码子  CCC  的  tRNA。RP  菌株含有  tRNA，限制了富含  GC  的基因组生物体异源蛋白质翻译。

克服蛋白质错误折叠和不溶解

ArcticExpress  感受态细胞经过改造，可在较低温度下改善蛋白质处理过程。这些细胞共表达嗜冷细菌南极油螺旋藻的冷适应型伴侣蛋白  Cpn10  和  Cpn60。南极油螺旋藻的  Cpn10  和  Cpn60  伴侣蛋白与大肠杆菌  GroEL  和  GroES  伴侣蛋白具有  74%  和  54%  的氨基酸相同度，且在  4–12°C  温度下具有高蛋白质重折叠活性。这些伴侣蛋白可在较低温度下改善蛋白质处理过程，增加活性可溶性重组蛋白质的产量。

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