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ChIP-seq_售前咨询

1. ChIP-seq的最低DNA起始量需要多少?

    1ng,纯化后30ng。

2. IP下的DNA片段过长(珠峰在2000bp~4000bp之间)对实验结果有影响吗?

    片段过长可能与蛋白本身结合的DNA片段就偏大有关,就伯豪已做的ChIP-seq项目经验来看 ,片段过长对后续结果分析是不会有影响的。后续建库会对大片段DNA进行再次打断至300 bp。

3. chip的对照怎么选择?input IGg做吗?

    input对照Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果,还可以根据Input中的靶序列的含量以及染色质沉淀中的靶序列的含量,按照取样比例换算出ChIP的效率。

   阳性对照,一般用anti-RNA Polymerase II抗体(阳性抗体),RNA Polymerase II是通用转录因子,在所有细胞中都能结合基因(为了保证阳性对照有效,一般选择阳性对照的引物是根据管家基因设计的)的核心启动子区,因此,理论上ChIP后PCR都会有条带。

   阴性对照,用普通的IgG做为阴性抗体,理论上不会ChIP下来任何DNA片段,但是由于非特异结合,或者实验过程中没发生结合的DNA清除不完全,可能也会出现比较浅的条带。

个完整的ChIP-seq数据通常应该包含input对照或阴性对照,一般推荐好的有input对照。

4. 伯豪客户使用伯豪提供ChIP-seq服务发表高分的文章?

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5. ChIP-seq的高级分析有哪些?

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