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CRISPR/Cas9基因敲除服务

CRISPR/Cas9基因编辑服务

背景介绍

CRISPR/Cas(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制,其主要功能是对抗入侵的病毒及外源DNA。科学家利用CRISPR-Cas系统可以对多种细胞的特定的基因组位点上进行切割,以便插入新的遗传物质。在需要对目的基因的功能进行破坏,或者要进行目的基因替换时都可以使用CRISPR-Cas系统,可以像编辑文字一样编辑基因,因此被称为基因编辑技术。
本技术具有简便、快捷、精准等优点,于2016年获得被喻为“豪华诺贝尔奖”的生命科学突破奖。CRISPR/Cas的开发为构建更高效的基因定点修饰技术提供了全新平台。

sgRNA与靶DNA结合,招募Cas9内切酶形成复合物,Cas9内切酶则切割,断裂DNA双链,体内启动DNA修复。在无外源模板的情况下,修复导致DNA移码突变,蛋白质无法翻译或者失去功能,达到了基因敲除(Knock-out)的目的。在有外源模板(双链断裂DNA同源的DNA片段)的情况下,可以通过人为的添加同源的DNA序列达到基因定点敲入(Knock-in)的目的。


CRISPR∕Cas9基因编辑原理



应用CRISPR技术建立miRNA-126的敲除细胞系。上图为sgRNA设计示意,下图为筛选阳性克隆电泳图。由伯豪生物实验室完成。