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蛋白质组-蛋白芯片-FullMoon蛋白芯片

FullMoon蛋白芯片介绍

蛋白质芯片技术是继基因芯片技术后发展起来的生物检测技术,是蛋白质组学研究中除了酵母双杂交、双向电泳技术、质谱技术等之外的一种重要的工具。蛋白质芯片技术具有平行、快速、自动化的优点,并且检测到的平行数据误差更小,更准确,这对于高通量的研究具有非常重要的意义。它的出现对于生物学、临床检验医学、遗传学、肿瘤学等多学科的进步具有极大的推动作用。蛋白质芯片技术根据芯片上固定的物质不同又分为抗体芯片与蛋白芯片。

近几年来,随着抗体技术的发展,抗体库的建设速度越来越快,生产了大量优质的抗体,从而推动了抗体芯片技术的发展与应用。抗体芯片技术在医学领域的应用,带动了相关科技论文的发表,数量与质量均呈上升趋势。

上海伯豪生物技术有限公司引进国外知名抗体芯片技术公司(Full Moon Biosystems)公司的技术和产品,建立了丰富的抗体芯片技术平台,推出的43余种抗体芯片可以用于检测生理或病理过程相关蛋白的表达丰度、筛选疾病标志物、探索药物作用机制、检测信号通路中成员的激活状态。使用的芯片产品已经在Nature Medicine, Journal of Clinical Investigation, Cancer Research, PLoS One, Journal of Biological Chemistry等专业学术杂志发表了高质量的论文。可以检测的样本包括培养的细胞、细胞培养上清、血清、血浆、冰冻组织、以及福尔马林浸泡或者Trizol浸泡的组织,石蜡包埋组织和切片也可以进行应用。

 

FullMoon蛋白芯片检测原理

 

蛋白芯片的应用

  1. 服务内容一:信号通路磷酸化水平检测
    可逆的蛋白磷酸化反应调节着细胞的大部分功能。蛋白质的可逆磷酸化是细胞中普遍存在的一类酶促共价键化学修饰反应,通过可逆的磷酸化反应,导致蛋白质活性和功能的改变,从而影响和调节着细胞的各种功能,如能量储存、细胞形态变化、蛋白质的合成、基因表达、信号因子的释放、肌肉收缩以及细胞代谢等。
  2. 服务内容二:蛋白质表达水平检测

 

服务流程

蛋白质抽提——抽提蛋白质生物素标记——标记后样本与芯片杂交——芯片扫描,数据读取与分析

 

样品要求

  1. 细胞
    约1×107个贴壁细胞去培养基后,常温PBS洗涤3次,直接加入裂解缓冲液,推荐使用Full Moon的Protein Extraction Buffer 或者RIPA Lysis Buffer,根据培养皿大小加入适量缓冲液,反复吹打,待细胞裂解后,收集溶液,4℃离心后收集上清,置-70℃冰箱保存,干冰运输。
    悬浮培养细胞直接收集,收集约1×107个细胞,常温PBS洗涤3次,低速离心沉淀细胞,弃去PBS(尽量去除干净),直接加入裂解缓冲液,推荐使用Full Moon的Protein Extraction Buffer 或者RIPA Lysis Buffer,根据细胞数量加入适量缓冲液,按操作流程裂解后,4℃离心后收集上清,置-70℃冰箱保存,干冰运输。
  2. 组织
    采集新鲜组织(注意:生物体血液限流后20分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净(尽量洗净血液),切为小块,放入液氮速冻后-70℃保存,干冰运输,或福尔马林/TriZol中4℃保存,一周内,常温运输。
  3. 血清和血浆
    采集新鲜血液,切忌溶血。全血分离血清,或EDTA抗凝血分离血浆,取100-500微升置-20℃或-70℃冰箱保存,干冰运输。。

 

案例分析

CXCL5(epithelial neutrophil-activating peptide-78)促进中性粒细胞浸润并可作为肝癌预后的判断指标

复旦大学中山医院肝癌研究所癌变与侵袭教育部重点实验室,复旦大学生物医学研究院的研究人员证实趋化因子CXCL5在肝癌的肿瘤生长、侵袭及预后中发挥重要的作用。研究人员通过比较CXCL5在几组具有不同转移性能的肝癌细胞系和919名肝癌患者体内mRNA和蛋白水平的变化,结合磷酸化抗体芯片这种高通量的实验平台发现CXCL5主要通过激活PI3K-Akt 和 ERK1/2两个信号通路促进肝癌的增殖、转移和侵袭。另一方面,在体外实验发现CXCL5对中性粒细胞具有直接趋化作用,而体内实验也证明肝癌细胞中的CXCL5促进肿瘤的生长、肺转移和瘤内中性粒细胞浸润。免疫组化分析表明,肝癌中CXCL5的过表达与中性粒细胞的浸润、患者总生存期短以及肿瘤复发相关。而多变量分析发现,单独的CXCL5的过表达或其与瘤内中性粒细胞的存在状态相结合,都可以作为一个新的预后衡量指标,同时CXCL5也可以作为肝癌一个新的治疗靶点。

原文出处: Overexpression of CXCL5 Mediates Neutrophil Infiltration and Indicates Poor Prognosis for Hepatocellular Carcinoma.Hepatology.2012, 56(6) :2242-54.